AChRAb試劑盒的測定涉及多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié),包括嚴(yán)格的樣本前處理、準(zhǔn)確的加樣操作、適時(shí)的顯色終止以及科學(xué)的數(shù)據(jù)解析。使用時(shí)需特別注意環(huán)境因素對試劑穩(wěn)定性的影響,并嚴(yán)格遵循說明書中的標(biāo)準(zhǔn)化流程。
1.環(huán)境控制
-室溫平衡:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出后必須充分恢復(fù)至室溫再使用,否則可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。未用完的板條應(yīng)重新密封保存,防止受潮或污染。
2.操作規(guī)范
-避免結(jié)晶干擾:濃洗滌液若出現(xiàn)結(jié)晶析出,可在水浴中輕微加熱助溶,但需確保不影響檢測結(jié)果。
-嚴(yán)格遵循說明書:不同批次的產(chǎn)品可能存在差異,如檢測限、靈敏度及顯色時(shí)間等參數(shù)均以隨附說明書為準(zhǔn),不可直接套用其他批次的經(jīng)驗(yàn)值。
3.樣本處理細(xì)節(jié)
-稀釋一致性:待測樣本的稀釋倍數(shù)需嚴(yán)格按照方案執(zhí)行,以保證數(shù)據(jù)的可比性。
-混勻充分性:添加試劑時(shí)務(wù)必充分混勻,避免局部濃度過高或過低導(dǎo)致假陽性/假陰性結(jié)果。
4.質(zhì)量控制
-雙孔平行實(shí)驗(yàn):建議對關(guān)鍵樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測,以提高結(jié)果可靠性。
-動(dòng)態(tài)監(jiān)測顯色進(jìn)程:顯色時(shí)間過長可能導(dǎo)致本底升高,需根據(jù)實(shí)際顯色情況及時(shí)終止反應(yīng)。
5.安全性管理
-個(gè)人防護(hù)裝備佩戴:操作過程中應(yīng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套等防護(hù)用品,避免接觸有害化學(xué)物質(zhì)。
-廢棄物規(guī)范處置:使用后的耗材和液體廢物應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定分類處理。
AChRAb試劑盒原理:
1.固相載體包被:使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面(如微孔板),并保持其免疫活性。在中,通常是用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體。
2.酶標(biāo)記物制備:將抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。例如,會(huì)使用HRP標(biāo)記的抗體。
3.樣本反應(yīng):在測定時(shí),把受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。對于AChRAb試劑盒,往包被單抗的微孔中依次加入樣品,再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體 -抗原 -酶標(biāo)抗體復(fù)合物。
4.洗滌分離:用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,以確保后續(xù)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。此時(shí),結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
5.顯色反應(yīng):加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)。比如加入底物TMB,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成的黃色。可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。